Quanto ne sai sull'applicazione delle perle magnetiche?

Quanto ne sai sull'applicazione delle perle magnetiche?

Sulla base della tecnologia SPRI, nel sistema di reazione del metodo delle sfere magnetiche, le molecole di acido nucleico (DNA e RNA) saranno compresse da forma lineare a forma sferica. Il DNA subirà drastici cambiamenti nella conformazione molecolare del DNA promossi da NaCl o MgCl2 in presenza di una certa concentrazione di PEG. Un gran numero di gruppi fosfato caricati negativamente sulla spina dorsale del fosfato si legherà alle perle magnetiche carbossiliche caricate negativamente sulla superficie. Questa interazione tra cariche negative e negative è attualmente ritenuta essere dovuta all'azione di ioni salini caricati positivamente (per esempio, Na+). Il gruppo fosfato caricato negativamente forma una struttura a ponte salino "anione-catione-anione" con il gruppo carbossilico attraverso lo ione sale dissociato (ad esempio Na+), in modo che il DNA sia specificamente adsorbito sulla superficie delle perline carbossiliche. Quando il tampone di reazione viene scartato, l'aggiunta della molecola d'acqua idrata rapidamente e completamente le molecole di acido nucleico e libera l'interazione ionica tra i tre, permettendo la purificazione delle molecole di acido nucleico adsorbite alle perline magnetiche. Utilizzando le proprietà magnetiche delle perline magnetiche, i frammenti di DNA possono essere raccolti ed eluiti da un campo magnetico applicato.

Beneficiando dello sviluppo della tecnologia di sequenziamento ad alto rendimento, le perle magnetiche sono anche molto apprezzate per il loro alto rendimento e l'applicabilità all'automazione. Inoltre, le perle magnetiche sono ampiamente utilizzate per la purificazione del DNA e la selezione delle dimensioni del doppio round (screening dei frammenti) nella preparazione delle librerie di sequenziamento di prossima generazione (NGS).

Lo scopo della purificazione del DNA è quello di rimuovere i frammenti indesiderati e recuperare i frammenti richiesti. Pertanto, scartare il surnatante e conservare le microsfere magnetiche, quindi lavare ed eluire. Poiché le perline assorbono preferenzialmente i frammenti di grandi dimensioni, una certa percentuale di perline può essere utilizzata per attirare i frammenti di DNA al di sopra di una certa dimensione. Il surnatante (frammenti di DNA non bersaglio) viene scartato e le perline vengono eluite per recuperare il DNA assorbito.

Lo scopo della selezione delle dimensioni del DNA a doppio giro (screening dei frammenti) è quello di selezionare frammenti di DNA di dimensioni specifiche. Poiché le microsfere assorbono preferenzialmente frammenti di grandi dimensioni, la selezione delle dimensioni viene eseguita con due cicli di manipolazione delle microsfere.

Perle magnetiche BunnyMagTM

Le perle magnetiche del BunnyMagTM DNA Purification & Size-Selection Beads sviluppato da BunnyTeeth Inc. sono simili alla maggior parte delle perle magnetiche presenti sul mercato

Struttura delle perle magnetiche BunnyMagTM (3 strati)

Il nucleo più interno è in polistirene (PS)

Secondo strato avvolto con materiale magnetico -Fe3O4

La superficie più esterna è un polimero modificato da gruppi carbossilici (-COOH)

Composizione principale: Perline superparamagnetiche, polietilenglicole (PEG), NaCl

Vantaggi delle perle magnetiche BunnyMagTM

(1) Basso requisito del campione: un'alta concentrazione di acidi nucleici può essere estratta da una quantità di materiale in tracce.

(2) Operazione semplice e veloce: l'intero processo operativo è fondamentalmente diviso in cinque fasi (lisi, legame, lavaggio, asciugatura, eluizione), e l'intero processo può essere completato entro 30-60 minuti senza operazione centrifuga per lo più.

(3) Qualità stabile e affidabile: le perle magnetiche libere assorbono più acidi nucleici, e il legame specifico rende la purezza dell'acido nucleico più alta, e il recupero dell'acido nucleico può essere regolato controllando i gruppi di superficie delle perle magnetiche.

(4) Funzionamento completamente automatizzato: l'estrattore di acido nucleico può essere utilizzato per ottenere un funzionamento automatizzato ad alta produttività e realizzare l'estrazione di decine o addirittura centinaia di campioni.

(5) Sicuro, non tossico e innocuo: i reagenti non contengono fenolo, cloroformio e altri reagenti chimici tossici, che è pienamente conforme al moderno concetto di protezione ambientale.