Fotometria in fibra: una guida per l'utente e una panoramica definitiva

Cos'è la fotometria in fibra? Come impostare un'operazione di fotometria in fibra? Come scegliere gli accessori per la fotometria in fibra più efficienti? La nostra guida completa sul sistema di fotometria in fibra può darti tutte le risposte.

Questa guida è composta da 4 capitoli che sono organizzati in base alle diverse fasi del percorso fotometrico della fibra.

Il Capitolo 1 introduce le conoscenze di base del sistema di fotometria in fibra.

Il capitolo 2 spiega il principio di funzionamento, i vantaggi e mostra i passaggi per impostare l'esperimento pertinente.

Il capitolo 3 elabora le funzioni di diversi modelli di fotometria in fibra e fornisce casi di studio di successo per mostrare la gamma di applicazioni.

Il capitolo 4 fornisce consigli sulla scelta degli accessori fotometrici in fibra più efficienti per migliorare l'esperimento nella pratica.

Nel caso tu sappia poco sulla fotometria delle fibre...

Il sistema di fotometria in fibra è un metodo di imaging ottico che consente ai ricercatori di rilevare l'attività di grandi popolazioni neuronali in animali che si muovono liberamente per un lungo periodo di tempo, il che aiuta a esplorare la correlazione tra attività neuronale e comportamenti animali.

Capitolo 1: Guida all'apprendimento della fotometria in fibra per principianti

Breve introduzione:

La fotometria in fibra è un metodo ottico basato sul principio della misurazione della luce emessa da molecole fluorescenti tramite fibre ottiche basate sul conteggio dei fotoni singoli correlato al tempo (TCSPC). Da questo principio, sappiamo che la realizzazione di questo esperimento richiede strumenti sonda in grado di esprimere fluorescenza nel tessuto, nonché un set di apparecchiature in grado di trasmettere fluorescenza e rilevarla.

Quindi esaminiamo prima gli strumenti di fluorescenza. Attualmente gli strumenti di fluorescenza più comunemente usati sono suddivisi in indicatori di calcio, indicatori di neurotrasmettitori, indicatori di tensione e così via. Poiché ci sono molti tipi di modelli animali per applicazioni sperimentali, e abbiamo anche bisogno di studiare specifiche regioni del cervello o anche specifici tipi di cellule, le tecniche di editing genetico sono state ampiamente utilizzate per lo sviluppo di sonde.

Gli indicatori di calcio codificati geneticamente comuni (GECI) sono proteine ​​fluorescenti derivate dalla proteina fluorescente verde (GFP, ecc.) e dalle sue varianti (ad es. GFP, YFP, CFP, RFP, ecc.) disposte circolarmente fuse con calmodulina (CaM) e M13 dominio della miosina chinasi della catena leggera. Quando Ca2+ è presente, si lega a CaM, portando all'interazione tra i domini strutturali M13 e CaM, innescando un riarrangiamento strutturale di cpEGFP, che migliora il segnale di fluorescenza verde/rosso.

I GECI più utilizzati sono: GCaMP, Pericams, Cameleon, TN-XXL e Twitch, tra cui GCaMP6, GCaMP7 sono ora ampiamente utilizzati negli studi di imaging del calcio in vivo grazie alla sua sensibilità superiore. Di seguito è riportato un riepilogo dei tipi di GEC comuni.

Capitolo 2: Ulteriori informazioni sulla fotometria in fibra: principio di funzionamento e processo

Ad esempio, i vantaggi della fotometria in fibra.

Lo studio del sistema nervoso degli animali svegli e che si muovono liberamente è una questione cruciale nella ricerca neuroscientifica contemporanea. Rilevando i segnali di calcio associati all'attività neuronale, siamo in grado di comprendere meglio i circuiti neurali complessi. Negli ultimi anni, gli sviluppi tecnologici, tra cui la microscopia a due fotoni, la microscopia a fotone singolo e la fotometria in fibra, ci hanno permesso di eseguire il rilevamento in tempo reale dei cambiamenti nei segnali del calcio negli animali. L'applicazione di queste tecniche richiede proteine ​​fluorescenti ingegnerizzate.