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Approcci comuni per la centrifugazione in laboratorio
Questo articolo vi fornirà gli approcci più comuni alla centrifugazione in laboratorio
La centrifugazione delle cellule è una fase indispensabile nei comuni esperimenti sulle cellule. Consente ai campioni aderenti di depositarsi completamente sul fondo della provetta e aiuta a confermare la concentrazione delle cellule. I campioni centrifugati possono essere utilizzati per esperimenti successivi, come colture cellulari primarie, colture di passaggi cellulari, sequenziamento di singole cellule, ecc.
A seconda del tipo di cellule e di organuli, è necessario adottare approcci diversi per la separazione centrifuga.
Quali sono quindi gli approcci comuni per la centrifugazione cellulare?
01 Centrifugazione differenziale
La centrifugazione differenziale separa particelle di dimensioni e forme diverse nella miscela eterogenea in base alla velocità di sedimentazione delle particelle, aumentando gradualmente la forza centrifuga. È tipicamente utilizzata per la separazione di campioni di laboratorio, come mitocondri, cloroplasti, proteine e virus.
Fasi della separazione
Fase 1: impostare una velocità relativamente bassa per consentire alle particelle ad alta densità di depositarsi sul fondo della provetta, mentre le particelle di dimensioni medio-piccole della miscela sono ancora sospese nel surnatante.
Fase 2: raccogliere il sedimento. Il surnatante risultante dalla fase 1 può essere centrifugato a una velocità maggiore per separare le particelle di dimensioni relativamente medie o piccole e così via.
02 Centrifugazione a gradiente di densità
La centrifugazione a gradiente di densità, nota anche come centrifugazione zonale, comprende la centrifugazione zonale e la centrifugazione a isodensità.
1. Centrifugazione zonale a rateo
La centrifugazione zonale a rateo è tipicamente utilizzata per separare cellule o organelli con densità simili ma dimensioni diverse. Caricare prima i terreni a gradiente di densità come saccarosio, glicerina, CsCl e Percoll nella provetta della centrifuga. Una cosa da notare è che la densità delle particelle del campione deve essere superiore alla densità di qualsiasi punto della colonna di liquido a gradiente. Poiché le particelle separate hanno velocità di sedimentazione diverse nel liquido di gradiente, i diversi componenti del campione miscelato possono formare le rispettive zone in posizioni diverse della colonna di liquido di gradiente; la separazione viene quindi realizzata durante la centrifugazione.
2. Centrifugazione isodensa
La centrifugazione isodensa viene applicata per separare particelle con densità diverse. Con una forza centrifuga e un tempo sufficienti, le cellule o gli organelli possono depositarsi o galleggiare nel mezzo con la stessa densità in un mezzo a gradiente continuo. La separazione si ottiene quando le cellule rimangono e raggiungono l'equilibrio. Il percoll è ampiamente adottato come mezzo, mentre CsCl, Cs2SO4 e triiodoformil-glucosamina possono ottenere gradienti stabili anche dopo una lunga centrifugazione.
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