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Dopo aver letto questo articolo, non dite di non conoscere la tecnologia PCR

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Dopo aver letto questo articolo, non dite di non conoscere la tecnologia PCR

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Dopo aver letto questo articolo, non dite di non conoscere la tecnologia PCR

I. Cos'è la PCR

La PCR, abbreviazione di Polymerase Chain Reaction (reazione a catena della polimerasi), è un metodo per amplificare da poche o decine di copie di DNA a milioni di copie ed è una delle tecnologie più importanti ad oggi. La PCR è stata ampiamente utilizzata nei test di paternità e nelle indagini penali.

La PCR può essere considerata una tecnica simile al processo di replicazione del DNA che avviene nelle cellule e che porta alla produzione di nuovi frammenti di DNA complementari utilizzando il DNA originale come modello. La replicazione del DNA nelle cellule è un processo molto complesso. La replicazione coinvolge una serie di fattori. La PCR è una reazione di replicazione del DNA eseguita in provetta e il principio di base è simile alla replicazione intracellulare del DNA, ma il sistema di reazione è relativamente semplice.

II. Principio di base della PCR

Il principio di base della PCR consiste nel prendere il DNA da amplificare come templato, utilizzare una coppia di frammenti oligonucleotidici complementari alle estremità 5′ e 3′ del templato come primer, sotto l'azione della DNA polimerasi estendersi lungo il filamento del templato secondo il meccanismo della replicazione semi-conservata fino al completamento della sintesi di nuovo DNA, e ripetere questo processo per ottenere l'amplificazione del frammento di DNA bersaglio.

III. Fasi fondamentali della PCR

① Denaturazione: Riscaldare il sistema di reazione a 95°C per denaturare tutto il DNA modello in DNA a singolo filamento

② Ricottura: Ridurre la temperatura alla temperatura appropriata per annealizzare i primer sul DNA campione

③ Estensione: Aumenta la temperatura a 72°C e la DNA polimerasi catalizza la reazione di sintesi del DNA con il substrato dNTP.

Le tre fasi di cui sopra sono chiamate ciclo, che viene ripetuto 25-30 volte per ottenere una grande quantità di DNA bersaglio.