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Screening per PCa di interazioni di librerie di proteine umane

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Screening per PCa di interazioni di librerie di proteine umane

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Principio della complementarità dei frammenti proteici Tecnologia PCA

Le proteine spesso non completano le loro funzioni in modo indipendente nelle cellule, ma di solito interagiscono con altre proteine per formare complessi, in modo da completare funzioni specifiche in un tempo e in uno spazio specifici. La comprensione dell'interazione tra le proteine, in particolare lo screening su larga scala e ad alto rendimento dell'interazione proteina-proteina, e la successiva rappresentazione della mappa di rete dell'interazione proteina-proteina sono di importanza insostituibile per rivelare la funzione di una proteina e chiarire infine il meccanismo molecolare di varie attività vitali nelle cellule.

Il saggio di complementazione proteica (PCA) è una nuova tecnologia per analizzare in modo intuitivo e rapido l'interazione e la localizzazione delle proteine nelle cellule viventi. Il meccanismo di questo metodo è il seguente: solo le proteine con una struttura completa possono realizzare le loro funzioni. Tuttavia, quando la proteina funzionale è divisa in metà N-terminale e C-terminale, nessuna delle due metà può svolgere un ruolo da sola, ma se è abbastanza vicina nello spazio, può completare e ripristinare la funzione originale. Collegare i due frammenti inattivi alle estremità N e C rispettivamente con la proteina bersaglio. Se le due proteine bersaglio interagiscono, i due frammenti della proteina funzionale segmentata saranno vicini nello spazio e formeranno nuovamente la proteina con attività funzionale. L'interazione tra le proteine bersaglio può essere determinata attraverso la rilevazione dell'attività. In base alle esigenze dei diversi esperimenti, le proteine funzionali utilizzate per la PCA includono la luciferasi e la proteina fluorescente.

Caratteristiche e vantaggi della tecnologia PCA biologica Meige

La libreria PCA dell'azienda comprende 18.000 proteine umane, in grado di analizzare in modo rapido e semplice l'interazione tra le proteine nelle cellule umane e l'interazione tra le proteine patogene e le proteine dell'ospite umano. Basandosi sulla tecnologia di complementarità dei frammenti proteici, l'azienda ha ottenuto il brevetto di invenzione nazionale per lo screening high-throughput delle interazioni proteina-proteina, che presenta le seguenti caratteristiche e vantaggi:

1. Rilevazione diretta e in situ delle interazioni proteina-proteina nelle cellule viventi.

2. La sensibilità è sufficientemente elevata da rilevare l'interazione proteina-proteina equivalente al livello di espressione endogena.

3. È possibile rilevare interazioni proteina-proteina transitorie e indirette.

4. Utilizzando un software bioinformatico, possiamo generare facilmente e rapidamente i risultati dell'analisi di Shengxin e disegnare la mappa della rete di interazione proteina-proteina

Fasi della tecnologia PCA biologica Meige:

1. Clonare il gene da testare nel vettore di espressione contenente l'N-terminale della proteina funzionale per costruire il plasmide esca;

2. Trasformare il plasmide esca in cellule e selezionare le cellule trasformate;

3. Il plasmide della libreria (contenente 18000 geni umani e clonato nel vettore di espressione contenente il C-terminale della proteina funzionale) è stato trasformato nelle cellule che esprimono il plasmide esca;

4. Screening high throughput e identificazione delle proteine che interagiscono con l'esca mediante citometria a flusso o sistema di segnalazione della luciferasi.

5. I risultati dell'analisi bioinformatica forniscono l'elenco delle proteine che interagiscono con le proteine esca.

6. Presentare la relazione sperimentale (compresi il processo operativo sperimentale, i dati e i grafici) e presentare l'elenco delle proteine che interagiscono con le proteine dell'esca.

7. (opzionale) verificare ulteriormente la proteina che interagisce con l'esca mediante PCA o immunofluorescenza cellulare o immunocoprecipitazione

Il cliente deve fornire il clonaggio del gene con la sequenza corretta e le informazioni pertinenti. Se il gene della proteina esca è clonato nella libreria dell'azienda, non è necessario fornirlo.

Ciclo: il ciclo dell'esperimento di screening PCa dell'interazione tra ciascuna proteina e la libreria è di 90 giorni lavorativi.

Presentare al completamento del servizio:

1). Relazione tecnica di servizio (processo operativo sperimentale, dati e grafici)

2). Elenco delle proteine che interagiscono con le proteine esca