Studio sulla rilevazione genica di campioni di idrotorace, ascite e surnatante

Il versamento pleurico maligno (MPE), noto anche come versamento pleurico, è un versamento pleurico causato dalla metastasi di tumori maligni originari della pleura o di altri tumori maligni che coinvolgono la pleura.

Sfondo

Il versamento pleurico maligno (MPE), noto anche come versamento pleurico, è un versamento pleurico causato dalla metastasi di tumori maligni originari della pleura o di altri tumori maligni che coinvolgono la pleura. Quasi tutti i tumori maligni possono invadere la pleura e produrre MPE, che è più comune nel cancro del polmone, nel cancro al seno, nel cancro gastrointestinale e in altri tipi di cancro[1].

Le cellule maligne nel versamento pleurico e/o nel tessuto pleurico sono il "gold standard" per la diagnosi di MPE. Lo studio ha riportato che la sensibilità della citologia del versamento pleurico nella diagnosi di MPE era del 60,0% (40,0%~87,0%)[2,3]. Le sue prestazioni diagnostiche dipendono dalla posizione del tumore. Se si trova sulla superficie delle cellule mesoteliali pleuriche, le cellule maligne cadono facilmente ed entrano nel versamento pleurico. Solo poche cellule maligne cadranno nello spazio pleurico quando si trovano in corrispondenza o al di sotto dello strato sieroso. La quantità minima di fluido richiesta per l'esame citopatologico è ancora controversa. Generalmente si ritiene che 20~50 ml siano sufficienti. Tuttavia, è riportato in letteratura che la quantità di liquido sottoposto ad esame >75 ml può migliorare il tasso diagnostico di MPE[4].

Studio di campioni di cellule del liquido pleurico nella rilevazione genica

1. Nel 2019, lo studio[5] del Peking University Cancer Hospital ha raccolto retrospettivamente 295 campioni di MPE da pazienti con adenocarcinoma polmonare.92 pazienti avevano campioni di tessuto e plasma abbinati e 248 pazienti avevano campioni di plasma. La coerenza tra il rilevamento di cellule maligne di versamento pleurico e il rilevamento del tessuto è stata dell'87,1%. La sensibilità e la specificità del rilevamento della mutazione EGFR delle cellule di versamento pleurico erano del 71,4% e del 96,5%, il che potrebbe riflettere meglio la mutazione EGFR del tessuto tumorale e guidare efficacemente il trattamento mirato dei pazienti.

Confronto dei risultati del rilevamento della mutazione EGFR tra MPE e tessuto

2. Il consenso degli esperti sul rilevamento della mutazione del gene EGFR T790M in pazienti cinesi con carcinoma polmonare non a piccole cellule[6] sottolinea che quando non è possibile ottenere tessuti, è possibile prendere in considerazione altri campioni come campioni di citologia tumorale o campioni di plasma per EGFR T790M rilevamento (Categoria 2A).

Rilevamento genico di campioni supernatanti di versamento pleurico

1.Uno studio[7]ha incluso 63 pazienti con carcinoma polmonare metastatico (n=30, coorte 1) o nessun tessuto tumorale corrispondente (n=33, coorte 2). Campioni di PE e plasma sono stati raccolti da ciascun paziente contemporaneamente. Il surnatante e il sedimento cellulare di PE sono stati trattati rispettivamente per estrarre il cfDNA (PE cfDNA) e il DNA del sedimento (sDNA). I risultati hanno mostrato che il 98,4% (62/63) dei campioni di PE cfDNA in tutti i pazienti presentava alterazioni somatiche rilevabili, mentre il 90,5% (57/63) di PE sDNA e l'87% (55/63) di plasma cfDNA. Vale a dire, il contenuto di ctDNA nel supernatante del versamento pleurico è molto più alto di quello delle cellule del sedimento del versamento pleurico e ha un tasso di rilevamento delle mutazioni più elevato e una maggiore abbondanza di rilevamento delle mutazioni: supernatante del versamento pleurico (98,4%)> cellule del versamento pleurico ( 90,5%).

Rilevamento delle variazioni di tutti i pazienti

2. Un altro studio[8] ha utilizzato il metodo del sequenziamento di seconda generazione (NGS) per rilevare la mutazione genica nel supernatante del liquido pleurico di pazienti affetti da adenocarcinoma polmonare (n=150). Tutti i 150 campioni hanno ottenuto una quantità sufficiente di DNA e 104 (90%) di 116 campioni sono stati testati con successo per NGS. Mutazioni somatiche sono state rilevate nell'82% dei campioni e mutazioni clinicamente rilevanti sono state trovate nel 50% dei pazienti. Il confronto delle mutazioni guida operabili rilevate nei campioni di surnatante e plasma ha mostrato una consistenza dell'84%.

Conclusione: il rilevamento del gene molecolare del supernatante del versamento pleurico rende conveniente il rilevamento del gene di routine. È molto ricco di DNA tumorale fresco, che può fornire campioni preziosi per il rilevamento del gene del cancro del polmone. Soprattutto per i pazienti con tessuto tumorale insufficiente, può ridurre il tasso di fallimento del rilevamento del gene, abbreviare il ciclo di rilevamento ed evitare la biopsia ripetuta.

Sovrapposizione di mutazioni guida operabili clinicamente rilevanti rilevate tra campioni di surnatante FNA e corrispondente rilevamento della biopsia liquida del cfDNA plasmatico

Invio del campione per l'ispezione

Per l'invio del campione, il versamento pleurico viene conservato in una provetta da centrifuga da 50 ml, 30-50 ml per il progetto multi gene tumorale, 15-20 ml per il progetto EGFR e trasportato a bassa temperatura.

Nella Raccomandazione 6 del Chinese Expert Consensus[9] sulla diagnosi di versamento pleurico, si sottolinea che per il carcinoma polmonare non a piccole cellule con MPE, campioni di tessuto tumorale o campioni di massa cellulare di sedimento di versamento pleurico possono essere selezionati per il rilevamento.

Sebbene i campioni di idrotorace svolgano prestazioni di rilevamento altamente coerenti con i campioni di tessuto nel rilevamento del gene del tumore. Tuttavia, è innegabile che il tasso di rilevamento dei campioni chirurgici o di puntura nel sito del tumore sia migliore di quello delle cellule di versamento pleurico o dei campioni surnatanti. Pertanto, in in termini di selezione del campione, il consenso degli esperti cinesi sull'applicazione clinica della tecnologia di sequenziamento di seconda generazione nel NSCLC raccomanda ancora che il test genetico dei pazienti con tumore sia la prima scelta per il test dei tessuti. In caso di campioni di tessuto insufficienti o tessuti inaccessibili, la biopsia liquida può essere selezionata come mezzo supplementare[10].

Punti chiave del consenso degli esperti cinesi sull'applicazione clinica della tecnologia di sequenziamento di seconda generazione nel NSCLC

Per i progetti relativi al carcinoma polmonare biologico Feishuo, come il kit di rilevamento della mutazione del gene EGFR/KRAS/BRAF/HER2/ALK/ROS1 umano (GXZZ 20203400094) e il kit di rilevamento della mutazione del gene EGFR umano (GXZZ 20193400366), l'estrazione del versamento pleurico e i campioni di cellule di precipitazione possono essere utilizzato per il rilevamento. Per i dettagli, si prega di contattare per discutere questioni di cooperazione.

Riferimento:

[1]Medicina (Kaunas). 15 agosto 2019; 55 (8): 490.

[2]DOI: 10.1136/thx.2010.136978.

[3]Can Respir J, 2020, 2020: 2950751.

[4]Cancer Cytopathol, 2014, 122(9): 657‐665.

[5] Cancro ai polmoni. 2019 settembre;135:116-122.

[6]Consenso degli esperti sul rilevamento della mutazione del gene EGFR T790M in pazienti cinesi con carcinoma polmonare non a piccole cellule

[7]Teranostica 2019; 9(19): 5532-5541.

[8]Annali di oncologia 30: 963–969, 2019

[9] Consenso degli esperti cinesi sulla diagnosi di versamento pleurico

[10]Consenso degli esperti cinesi sull'applicazione clinica della tecnologia di sequenziamento di seconda generazione nel NSCLC (versione 2020)